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RT-PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)請(qǐng)注意

瀏覽次數(shù):621發(fā)布日期:2021-11-25
  RT-PCR試劑盒反應(yīng)就是從RNA反轉(zhuǎn)錄至cDNA,然后通過(guò)PCR反應(yīng)擴(kuò)增cDNA的過(guò)程。Super一步法RT-PCR(AMV)試劑盒采用了一步反應(yīng)法完成整個(gè)RT-PCR反應(yīng),即RNA-cDNA-PCR反應(yīng)操作在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行,反應(yīng)過(guò)程中不需增加額外的步驟,就可完成整個(gè)RT-PCR反應(yīng),同時(shí)整個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)且含有電泳時(shí)所需要的試劑,可直接上樣電泳。本試劑盒具有方便、簡(jiǎn)捷、靈敏度高、重復(fù)性好的特點(diǎn),可適用于各種動(dòng)、植物、病毒RNA的PCR檢測(cè)。
  RT-PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)請(qǐng)注意:
  1.用戶可根據(jù)自己的情況調(diào)整優(yōu)化PCR反應(yīng)擴(kuò)增參數(shù):
  ·退火溫度:可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)?shù)靥岣呋蚪档屯嘶饻囟龋?0℃~65℃)。
  ·延伸時(shí)間:延伸時(shí)間因目的序列長(zhǎng)度的不同而不同
  ·循環(huán)次數(shù):cDNA量較少時(shí),循環(huán)次數(shù)可增加為40~50次
  ·調(diào)整鎂離子的濃度
  2.用戶可根據(jù)本試劑盒提供的β-actin引物(陽(yáng)性對(duì)照)驗(yàn)證RT-PCR體系是否良好(選做):
 ?。?)使用前每個(gè)組份輕輕混勻,然后2000rpm離心20s;
 ?。?)滅過(guò)菌且無(wú)核酸酶的0.2mlPCR管,依次加入
 ?。?)輕混勻,2000rpm離心20s后進(jìn)行RT-PCR反應(yīng);RT反應(yīng)條件:42℃保溫1hr PCR擴(kuò)增條件:94°C,5min;
  94°C變性,30sec;
  54°C退火,45s;
  72°C延伸,1min;
  33個(gè)循環(huán);
  72°C,10min,
 ?。?)應(yīng)結(jié)束后,取反應(yīng)液10uL進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,確認(rèn)β-actin基因目的產(chǎn)物片斷為359bp。
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