?ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值i大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
人神經(jīng)絲蛋白M英文名稱:NF-M ELISA kit產(chǎn)品別名:人NF-M elisa試劑盒用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
產(chǎn)品名稱:人神經(jīng)絲蛋白MELISA試劑盒
英文名稱: NF-M ELISA kit
規(guī)格 :48T/96T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..
標(biāo)本的采集與保存:
1、血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時(shí)或4oC 過夜,然后1000×g 離心20 分鐘,取上清即
可,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿:用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘,
取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿:
1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨,該過程需在冰上進(jìn)行(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次)。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測。
4、其它生物標(biāo)本:請1000×g 離心20 分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時(shí),可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;
補(bǔ)體的控制方法:
①用EDTA稀釋標(biāo)本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過長或凝固不全等;
控制方法:采血時(shí)規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時(shí)采用無菌試管,經(jīng)檢測后再低溫凍存;保存時(shí)間不宜過久,檢測時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本;對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
公司采用全是進(jìn)口原材料研,發(fā)靈敏性高,高效性,*抗體,吸附均勻、吸附性好,回收利用率高、可靠性強(qiáng),無效包退包換,公司提供免費(fèi)代測服務(wù),各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全,質(zhì)量可靠。
以下是人神經(jīng)絲蛋白MELISA試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
植物酸葡萄糖變位酶(phosphoglucomutase;PGM)活性光譜法定量檢測試盒MC Ab(Human melanocyte antibody) ELISA Kit 人黑色素細(xì)胞抗體
真菌/酵母酸葡萄糖變位酶(phosphoglucomutase;PGM)活性光譜法定量檢測試盒TFR/CD71(Human transferrin receptor) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體
細(xì)胞酸葡萄糖異構(gòu)酶(phosphoglucose isomerase;GPI)活性光譜法定量檢測試盒P53(Human p53/tumor protein) ELISA kit 人P53
組織酸葡萄糖異構(gòu)酶(phosphoglucose isomerase;GPI)活性光譜法定量檢測試盒Human Cyclin-D3 ELISA Kit 人細(xì)胞周期素D3
植物酸葡萄糖異構(gòu)酶(phosphoglucose isomerase;GPI)活性光譜法定量檢測試盒Human Cyclin-D2 ELISA Kit 人細(xì)胞周期素D2
真菌/酵母酸葡萄糖異構(gòu)酶(phosphoglucose isomerase;GPI)活性光譜法定量檢測試盒Human Cyclin-D1 ELISA Kit 人細(xì)胞周期素D1
細(xì)胞S腺苷同型半胱酸核苷酶(AdoHcy nucleosidase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試盒ES(Human Endostatin) ELISA Kit 人內(nèi)皮抑素
組織S腺苷同型半胱酸核苷酶(AdoHcy nucleosidase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試盒FE(Human ferritin) ELISA Kit 人鐵蛋白
植物S腺苷同型半胱酸核苷酶(AdoHcy nucleosidase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試盒MTF(Human microtransferrinuria) ELISA Kit 人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白
細(xì)菌S腺苷同型半胱酸核苷酶(AdoHcy nucleosidase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試盒TIMP-1(Human tissue inhibitor of metal protease 1) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1
真菌/酵母S腺苷同型半胱酸核苷酶(AdoHcy nucleosidase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試盒MBP(Human myelin basic protein autoantibody) ELISA Kit 人髓鞘性蛋白抗體
通用型細(xì)胞對氧酶1(PON1)有機(jī)酸酶活性比色法定量檢測試盒TPA(Human Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit 人組織多肽抗原
通用型組織對氧酶1(PON1)有機(jī)酸酶活性比色法定量檢測試盒Human lung cancer Marker ELISA Kit 人肺癌標(biāo)志物
通用型血液對氧酶1(PON1)有機(jī)酸酶活性比色法定量檢測試盒human gastric carcinoma Marker ELISA Kit 人胃癌標(biāo)志物
通用型細(xì)胞對氧酶1(PON1)有機(jī)酸酶活性熒光定量檢測試盒HSCCAg-2(uman Squamous Cell Carcinoma Antigen 2) ELISA Kit 人鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原2Bovine MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit
Bovine MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA KitZNF473英文名稱:TRAP1FAM96B蛋白體
人神經(jīng)絲蛋白MELISA試劑盒化學(xué),合成試, 4-羥四喃
CK5+6英文名稱:CHD8人型肝炎IgG(HDV IgG)免疫試盒
ZFAND5英文名稱:TEM8胚胎鋅指樣蛋白1體
化學(xué),固相合成, 依澤替米貝
SERCA1 ATPase英文名稱:TFPI-2通用轉(zhuǎn)錄因子GTF2B抗體
ZNF146英文名稱:TSPAN15FAM29蛋白體
化學(xué),合成試, 4-磺酰
SPINK1英文名稱:TGF alpha化gp130抗體
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